您的位置 首页 DNA/RNA技术

质粒抽提实验方案

发布: 2019-07-16 6,371阅读 159评论

质粒抽提实验方案

质粒抽提实验流程：如图片所示

  1. 菌体收集

* 从选择培养基中挑取单克隆菌落，接种到含有适当浓度抗生素的2-5毫升LB培养液中，37°C条件下剧烈震荡（300 rpm）培养8小时。

* 将培养后的菌液按照1：500到1：1000的比例稀释至3 ml选择性LB培养基中，37°C条件下剧烈震荡（300 rpm）培养12–16小时。

* 6000 x g离心15分钟后收集菌体细胞，并尽可能去除上清。在0.1-0.5 ml的悬浮缓冲液（50 mm Tris-Cl，10 mm EDTA，100μg/ml RNase A，PH 8.0）中重新悬浮细菌颗粒，直到没有细胞团块。

  1. 细胞裂解

* 密封管中加入0.25毫升裂解缓冲液，用力翻转4-6次使其充分混匀，室温（15-25°C）条件下孵育5分钟，不要旋涡，否则会导致基因组DNA断裂。裂解后的菌液应该看起来呈粘稠状，注意裂解反应应控制在5分钟内。

  1. 中和反应

* 加入0.3ml中和缓冲液，用力翻转4-6次后置于冰上孵育5分钟。加入中和缓冲液后会形成絮状白色沉淀，使得混合物的粘性降低。沉淀出来的物质中包含基因组DNA、蛋白质、细胞碎片等。溶解液应充分混合，以确保十二烷基硫酸钾沉淀均匀。如果混合物仍然粘稠，则需要进一步的中和，以达到完全中和的效果。当悬浮液为均匀无色状态时，表明SDS已有效沉淀。

  1. 过柱

* 将上清液小心地转移至吸附柱并安装至收集管中，13,000 rpm离心1min。

* 若上清液较浑浊，则需进行第二次较短的离心，以避免将悬浮物或颗粒物质保留在吸附柱上。悬浮物（使样品显得浑浊）会堵塞吸附柱，减少或消除流量。

  1. 柱平衡

* 向放置于收集管中的吸附柱中添加0.7 ml的洗涤缓冲液，13,000 rpm离心10min。然后使用1 ml平衡缓冲液（750 mM氯化钠，50 mM氯化钾，pH7.0，15%异丙醇）进行平衡。

  1. 洗脱

* 用0.8 ml洗脱缓冲液（1.23 mNaCl，50 mM Tris-Cl，ph 8.5，15%v异丙醇）洗脱DNA，在1.5 ml或2 ml离心管中收集洗脱液。

* 通过向洗脱的DNA中添加0.7倍体积（0.56毫升/0.8毫升洗脱体积）的室温异丙醇沉淀DNA，≥10,000 rpm离心30min，去除上清。

* 1ml 70%乙醇洗涤DNA，10,000rpm离心10分钟，去除上清。用70%的乙醇去除沉淀盐，用更易挥发的乙醇代替异丙醇，使DNA更容易再溶解。

* 将吸附有质粒DNA的硅胶膜风干5-10分钟，然后在合适的缓冲液（例如，TE缓冲液，pH8.0或10mm tris-Hcl，pH8.5）中重新溶解DNA。

  1. 产量的测定

为了定量核酸浓度，在TE缓冲液中稀释质粒DNA 1:100或1:50（取决于质粒拷贝数），并在260 nm（A260）和280 nm（A280）处测定吸光度（光密度），使用TE缓冲液作为空白对照。此测量方法可使用公式直接计算核酸浓度：

[DNA] (μg/mL) = A260 × Dilution factor × 50

 

卡梅德生物科技（天津）有限公司真诚期待与您的合作！

323赞
标签:



相关文章

发表回复

您的电子邮箱地址不会被公开。 必填项已用*标注

评论列表(159)

  5. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали срочный сервисный центр asus, можете посмотреть на сайте: сервисный центр asus адреса
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  6. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали ремонт телевизоров xiaomi адреса, можете посмотреть на сайте: ремонт телевизоров xiaomi в москве
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  7. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали сервисный центр asus сервис, можете посмотреть на сайте: сервисный центр asus
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  8. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали ремонт телевизоров xiaomi в москве, можете посмотреть на сайте: ремонт телевизоров xiaomi
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  9. Ремонт телевизоров Xiaomi Москва说道：

    Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали ремонт телевизоров xiaomi рядом, можете посмотреть на сайте: ремонт телевизоров xiaomi сервис
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  16. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали официальный сервисный центр xiaomi, можете посмотреть на сайте: официальный сервисный центр xiaomi
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  27. Профессиональный сервисный центр по ремонту сотовых телефонов в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт мобильных
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  28. Начните массовую индексацию ссылок в Google прямо cейчас!
    Быстрая индексация ссылок имеет ключевое значение для успеха вашего онлайн-бизнеса. Чем быстрее поисковые системы обнаружат и проиндексируют ваши ссылки, тем быстрее вы сможете привлечь новую аудиторию и повысить позиции вашего сайта в результатах поиска.
    Не теряйте времени! Начните пользоваться нашим сервисом для ускоренной индексации внешних ссылок в Google и Yandex. Зарегистрируйтесь сегодня и получите первые результаты уже завтра. Ваш успех в ваших руках!

    回复

  31. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: сервис центры бытовой техники воронеж
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  37. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: ремонт бытовой техники в волгограде
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  40. Ремонт автомагнитол в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту автомагнитол в Москве.
    Мы предлагаем: отремонтировать автомагнитолу
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  41. Профессиональный сервисный центр по ремонту сигвеев в Москве.
    Мы предлагаем: цены на ремонт сигвеев
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  42. Профессиональный сервисный центр по ремонту сетевых хранилищ в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт сетевых хранилищ с гарантией
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  45. Профессиональный сервисный центр по ремонту МФУ в Москве.
    Мы предлагаем: сервис по ремонту мфу
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  46. Ремонт посудомоечных машин в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту посудомоечных машин с выездом на дом в Москве.
    Мы предлагаем: замена помпы в посудомоечной машине стоимость
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  47. Профессиональный сервисный центр по ремонту моноблоков в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт моноблоков цена
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  48. Профессиональный сервисный центр по ремонту гироскутеров в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт гироскутера
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  49. Ремонт кондиционеров в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту кондиционеров в Москве.
    Мы предлагаем: стоимость ремонта кондиционера
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  51. ремонт ноутбуков apple в москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту компьютеров и ноутбуков в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт macbook m1
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  55. ремонт бытовой техники в ростове на дону说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем:сервисные центры в ростове на дону
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  59. [url=https://remont-kondicionerov-wik.ru]ремонт кондиционеров[/url]

    回复

  60. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: ремонт крупногабаритной техники в перми
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  61. ремонт бытовой техники тюмень说道：

    Если вы искали где отремонтировать сломаную технику, обратите внимание – [url=https://tyumen.profi-teh-remont.ru]ремонт цифровой техники тюмень[/url]

    回复

  62. Профессиональный сервисный центр по ремонту кнаручных часов от советских до швейцарских в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт часов
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  63. Профессиональный сервисный центр по ремонту мониторов в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт монитора на дому
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  65. ремонт техники в нижнем новгороде说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: сервисные центры по ремонту техники в нижнем новгороде
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  66. Ремонт камер видео наблюдения в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту камер видео наблюдения по Москве.
    Мы предлагаем: ремонт камер наблюдения
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  67. Ремонт системных блоков в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту компьютероной техники в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт компьютеров срочно
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  68. <a href=”https://remont-kondicionerov-wik.ru”>надежный сервис ремонта кондиционеров</a>

    回复

  69. Профессиональный сервисный центр по ремонту компьютерных блоков питания в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт блоков питания москва
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  70. Хочу поделиться опытом покупки в одном интернет-магазине сантехники. Решил обновить ванную комнату и искал место, где можно найти широкий выбор раковин и ванн. Этот магазин приятно удивил своим ассортиментом и сервисом. Там есть всё: от классических чугунных ванн до современных акриловых моделей.

    Если вам нужна раковина размеры , то это точно туда. Цены конкурентные, а качество товаров подтверждено сертификатами. Консультанты помогли с выбором, ответили на все вопросы. Доставка пришла вовремя, и установка прошла без проблем. Остался очень доволен покупкой и сервисом.

    回复

  71. Профессиональный сервисный центр по ремонту фото техники от зеркальных до цифровых фотоаппаратов.
    Мы предлагаем: ремонт проекторов в москве
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  72. Профессиональный сервисный центр по ремонту компьютероной техники в Москве.
    Мы предлагаем: диагностика системного блока компьютера
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  73. Профессиональный сервисный центр по ремонту фототехники в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт фотовспышек с гарантией
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!
    Подробнее на сайте сервисного центра remont-vspyshek-realm.ru

    回复

  78. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: сервис центры бытовой техники москва
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  137. Wow, awesome weblog structure! How lengthy have you ever been running a blog for?
    you made running a blog look easy. The full glance of your site is magnificent, let alone
    the content! You can see similar here sklep internetowy

    回复
联系我们

联系我们

(44)07934433023

在线咨询: QQ交谈

邮箱: info@bioengx.org

关注微信
微信扫一扫关注我们

微信扫一扫关注我们

关注微博
返回顶部